tổng quát
Immunofixation là một thử nghiệm trong phòng thí nghiệm cho phép xác định và gõ các gamma globulin có trong mẫu sinh học.
Cụ thể, phân tích cho phép nghiên cứu - trong máu hoặc trong nước tiểu của bệnh nhân - các nhóm globulin miễn dịch (IgA, IgG, IgM, IgE hoặc IgD) và loại di động kappa hoặc lambda chuỗi nhẹ, theo khả năng di động điện di cụ thể của họ . Sau đó, để xác định gamma globulin có liên quan, sự kết hợp miễn dịch liên quan đến việc tiêm các kháng nguyên cụ thể cho đoạn hoặc kháng thể tương ứng (kháng thể kháng immunoglobulin ): sự hiện diện của sự thay đổi nghi ngờ được xác nhận bởi sự hình thành của một kết tủa, có thể nhìn thấy bằng mắt thường hoặc dưới kính hiển vi.
Thông tin này có tầm quan trọng rất lớn để thiết lập, đặc biệt là chẩn đoán các bệnh về tế bào plasma (gammopathies hoặc dattrasias tế bào plasma). Miễn dịch kết hợp rất hữu ích cho việc đánh giá và theo dõi đa u tủy, Waldenström macroglobulinemia và amyloidosis nguyên phát (còn gọi là amyloidosis chuỗi nhẹ).
Cái gì
Sự kết hợp miễn dịch (hay miễn dịch chọn lọc, cũng được viết tắt là từ viết tắt IFE ) là một kỹ thuật có thể xác định xem và loại nào của globulin miễn dịch (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) hoặc loại chuỗi nhẹ kappa hoặc lambda, có trong thừa hoặc khiếm khuyết trong huyết thanh và trong nước tiểu của bệnh nhân.
Các chuỗi ánh sáng kappa và lambda đặc trưng cho thành phần đơn dòng, tức là các kháng thể có cùng cấu trúc hóa học.
Miễn dịch Sieric và tiết niệu: khi nào được chỉ định?
Plasmacellular dyscrasias hoặc gammopathies là một nhóm các rối loạn không đồng nhất, không rõ nguyên nhân, đặc trưng bởi:
- Sự tăng sinh của một bản sao của các tế bào B là không tương xứng ;
- Sự hiện diện trong huyết thanh và / hoặc nước tiểu của một loại immunoglobulin (hoặc tiểu đơn vị polypeptide của nó), đồng nhất về cấu trúc và điện di ( đơn dòng ).
Thông thường, các cấu trúc tế bào plasma được chẩn đoán bằng cách sử dụng điện di protein huyết thanh và nước tiểu, sau đó là phương pháp miễn dịch huyết thanh (IFE).
Đồng thời, xét nghiệm máu có thể được chỉ định để đo tổng nồng độ immunoglobulin (IgG + IgM + IgA).
Để tìm hiểu thêm: Globulin miễn dịch - Chúng là gì, Cách thức đo lường và Giá trị của Tài liệu tham khảo »Miễn dịch: nguyên tắc cơ bản
Sự kết hợp miễn dịch là kiểm tra hai giai đoạn (đầu tiên là điện di trên gel agarose, sau đó là kích thích miễn dịch với kháng huyết thanh đặc hiệu ).
Bước đầu tiên của quá trình kết hợp miễn dịch cũng giống như bước ĐIỆN TỬ của protein (hoặc protidogramma), do đó cần phải nhớ một số khái niệm:
- Điện di là một phân tích trong phòng thí nghiệm cho phép xác định lượng protein có trong huyết thanh hoặc các mẫu sinh học khác và, đối với từng phân đoạn, nó tiết lộ nếu có bất kỳ sự bất thường nào về chất lượng. Cụ thể, thử nghiệm này cho phép tách protein thành năm nhóm: albumin, globulin alpha 1, globulin alpha 2, globulin beta và globulin gamma ; thứ hai được nghiên cứu cụ thể hơn với immunofixation.
- Điện di là phương pháp phân tách dựa trên tốc độ di chuyển khác nhau của các hạt tích điện, thông qua dung dịch và môi trường hỗ trợ trơ, dưới tác động của điện trường, được tạo ra bởi dòng điện trực tiếp. Trong thực tế, thử nghiệm khai thác điện tích và khối lượng phân tử của protein có trong mẫu của bệnh nhân. Dưới sự thúc đẩy của điện trường, các đại phân tử này di chuyển và "nhóm" theo loại, đáp ứng với căng thẳng theo một cách đặc trưng. Kết quả ( kiểu điện di ) bao gồm các đỉnh và đường cong khác nhau, theo đó các phân số của protein tương ứng. Thông thường, đỉnh đầu tiên, cao hơn và hẹp hơn, là của albumin ; để theo dõi, các đỉnh của globulin được quan sát, thấp hơn nhiều so với albumin. Sự tăng hoặc giảm biên độ và cường độ của các đỉnh được hình thành trong dấu vết cho thấy sự hiện diện lớn hơn hoặc ít hơn của các protein của từng loại; càng nhiều protein có mặt trong một dải, đỉnh tương ứng càng cao. Trong trường hợp gamma globulin, nếu bạn muốn biết số lượng của từng loại khác nhau (IgA, IgM, IgG, v.v.), bạn sẽ cần phải sử dụng một liều duy nhất. Nói chung, càng nhiều gamma globulin có mặt trong một ban nhạc, đỉnh tương ứng càng cao; chiều cao tương ứng với tổng số lượng protein thuộc về một loại nhất định.
IMMUNOFISSAZIONE thấy trước:
1) Điện di gel Agarose : mẫu bệnh nhân (huyết thanh hoặc nước tiểu) được lắng đọng trên một dải điện di, tức là hỗ trợ di chuyển (thường là gel agarose). Thông qua ứng dụng của điện trường, được tạo ra bởi một dòng điện trực tiếp, thu được các dải khác nhau. Trong thực tế, mọi loại gamma globulin có trong hỗn hợp (có trong mẫu của bệnh nhân) đều di chuyển theo khối lượng phân tử và điện tích. Khả năng di động điện di khác nhau của gamma globulin giúp xác định chúng (mỗi trong số chúng trùng với một dải cụ thể trong đường điện di) và quan sát bất kỳ sự bất thường nào.
2) Giảm miễn dịch với Antisera cụ thể (Fixation) : các kháng nguyên đặc hiệu cho một kháng thể nhất định hoặc một đoạn (chống IgG, chống IgA, chống IgM, chống kappa hoặc chống chuỗi ) được thêm vào từng dải điện di. chuỗi ánh sáng lambda). Nếu có protein đơn dòng, sự tương tác của kháng nguyên với kháng thể tương ứng sẽ tạo ra một dải hẹp (điều này có nghĩa là kết quả là dương tính) và sự hình thành kết tủa, có thể nhìn thấy bằng mắt thường hoặc dưới kính hiển vi. Cuối cùng, mẫu được xử lý (tức là rửa và tô màu) để loại bỏ các protein chưa kết tủa, để thu được gel khô và tiến hành đọc kết quả.
Tại sao có
Miễn dịch là gì?
Kết hợp miễn dịch huyết thanh là một xét nghiệm được chỉ định để chẩn đoán hoặc theo dõi các bệnh được đặc trưng bởi sự thay đổi gamma globulin, đặc biệt là khi nó liên quan đến việc sản xuất thành phần đơn dòng ( bệnh giao tử đơn dòng ).
Để biết thêm: Gammopathies Monoclonal - Chúng là gì và chúng là gì »Sự kết hợp miễn dịch rất hữu ích trong các trường hợp nghi ngờ mắc chứng loạn sắc tố plasmacellular và rất cần thiết cho nghiên cứu MIELOMA (và các bệnh liên quan) và MGUS (từ viết tắt của "gammapatie đơn dòng có ý nghĩa không chắc chắn").
Việc kiểm tra này cũng cho phép đánh giá Waldenström macroglobulinemia và amyloidosis chuỗi nhẹ ( AL ).
Miễn dịch kết hợp: khi nào kỳ thi được quy định?
Dấu hiệu cho thấy sự kết hợp miễn dịch là sau những phát hiện lâm sàng hoặc trong phòng thí nghiệm làm tăng sự nghi ngờ về những thay đổi trong kháng thể đơn dòng hoặc globulin miễn dịch trong huyết thanh hoặc nước tiểu.
Ví dụ, xét nghiệm này cho phép làm sâu sắc hơn kết quả của điện di seropro- hoặc tiết niệu: khi trong đường điện di, các dải tương ứng với các globulin gamma đi chệch khỏi quy tắc, phương pháp miễn dịch xác định protein nào bị thay đổi, về mặt số lượng và chất lượng.
Tóm lại, có thể chỉ định phương pháp miễn dịch huyết thanh:
- Trong trường hợp các xét nghiệm khác trong phòng thí nghiệm cung cấp một kết quả bất thường, về mặt vắng mặt hoặc lượng protein huyết tương thấp hơn và cao hơn bình thường;
- Khi chúng tôi nghi ngờ sự hiện diện của các bệnh được đặc trưng bởi việc sản xuất một thành phần đơn dòng, chẳng hạn như:
- Nhiều u tủy và các biến thể của nó;
- Waldenström macroglobulinemia;
- Amyloidosis;
- Khi bệnh nhân có các triệu chứng và dấu hiệu gây ra sự hiện diện của bệnh gammone đơn dòng hoặc đa u tủy bị nghi ngờ, chẳng hạn như:
- Đau xương;
- thiếu máu;
- Dễ mệt mỏi;
- Nhiễm trùng định kỳ;
- Gãy xương không giải thích được.
Trong trường hợp đa u tủy, điện di protein và kết hợp miễn dịch cũng rất hữu ích để theo dõi tiến triển của bệnh (theo dõi).
Miễn dịch kết hợp: trên mẫu nào có thể được thực hiện?
Các mẫu sinh học có thể được điều hòa miễn dịch là chủ yếu:
- Huyết thanh (huyết thanh miễn dịch);
- Nước tiểu (kết hợp miễn dịch nước tiểu);
- Rượu * (rượu immunofixation).
* Lưu ý : dịch não tủy hoặc chất lỏng là chất lỏng thấm và bảo vệ não, tủy sống, dây thần kinh sọ và rễ cột sống.
Giá trị bình thường
Một kết quả NEGECT của huyết thanh và kết hợp miễn dịch tiết niệu đối với các globulin gamma đơn dòng hoặc đa dòng được coi là BÌNH THƯỜNG .
Phạm vi Globuline
Các globulin gamma chiếm 9-20% tổng số protein huyết tương.
- Giá trị tham chiếu Gamma globulin : 0, 9-1, 4 g / dl
Liên quan đến tổng nồng độ của globulin miễn dịch ( IgG + IgM + IgA ), người ta tin rằng các giá trị trong khoảng từ 600 đến 2300 mg / dl là bình thường.
- Giá trị tham khảo Immunogobulin trong huyết thanh :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Lưu ý : khoảng thời gian tham khảo của kiểm tra có thể thay đổi một chút tùy thuộc vào độ tuổi, giới tính và dụng cụ được sử dụng trong phòng thí nghiệm phân tích. Vì lý do này, nên tham khảo các phạm vi được báo cáo trực tiếp trên báo cáo. Cũng nên nhớ rằng các kết quả phân tích phải được đánh giá một cách tổng thể bởi bác sĩ đa khoa, người biết hình ảnh anamnests của bệnh nhân.
Giá trị cao - Nguyên nhân
Sự gia tăng của globulin gamma có thể là:
- Polyclonal, nếu việc sản xuất globulin miễn dịch không đồng nhất, tức là tất cả các thành phần của phạm vi globulin - được sản xuất hoặc có nguồn gốc từ các tế bào plasma khác nhau - đều bị ảnh hưởng bởi sự gia tăng;
- Monoclonal, khi gamma globulin được sản xuất hoặc có nguồn gốc từ một loại tế bào plasma duy nhất.
Sự gia tăng trong phạm vi globuline đa dòng có thể được liên kết với:
- Bệnh viêm mãn tính;
- Viêm khớp dạng thấp;
- Lupus ban đỏ hệ thống;
- Bệnh mãn tính của gan (như viêm gan và xơ gan);
- Nhiễm trùng cấp tính và mãn tính;
- Chích ngừa gần đây;
- Một số bệnh ung thư.
Thay vào đó, giá trị gamma globulin đơn dòng cao có thể chỉ ra, thay vào đó, sự hiện diện của:
- Một số tân sinh và viêm mạn tính;
- Đa u tủy;
- u lympho;
- Macroglobulinemia của Waldenström.
Sự dư thừa của gamma globulin được gọi là hypergammaglobulinemia, trong khi thiếu hụt được gọi là hạ đường huyết .
Giá trị thấp - Nguyên nhân
Việc giảm gamma globulin có thể chỉ ra sự hiện diện của các bệnh di truyền khác nhau của hệ thống miễn dịch, bao gồm cả bệnh agammaglobulinemia, hoặc suy giảm miễn dịch thứ phát (ví dụ như AIDS, suy thận, nhiễm trùng huyết cấp tính và hội chứng Cushing).
Việc giảm giá trị gamma globulin cũng có thể phụ thuộc vào lượng thuốc uống tế bào, thuốc ức chế miễn dịch và steroid.
Cách thực hiện
Miễn dịch kết hợp
Huyết thanh miễn dịch kết hợp liên quan đến một bản vẽ máu đơn giản từ tĩnh mạch cánh tay. Huyết thanh thu được bằng cách ly tâm mẫu sinh học; trên thực tế, điều này cho phép tách phần chứa các tế bào (phần cơ) khỏi phần chất lỏng của máu (huyết tương). Huyết thanh không có yếu tố đông máu (fibrinogen, yếu tố VIII, yếu tố V và prothrombin).
Kết hợp miễn dịch tiết niệu
Để thực hiện quá trình miễn dịch hóa nước tiểu cần phải thu thập một lượng nhỏ nước tiểu trong một hộp đựng vô trùng đặc biệt. Theo chỉ định của bác sĩ và phòng thí nghiệm, mẫu có thể được thu thập mà không có thời gian chính xác ( ngẫu nhiên ) hoặc trong vòng 24 giờ .
Sự kết hợp miễn dịch của rượu
Phân tích đòi hỏi phải loại bỏ một lượng nhỏ dịch não tủy, bằng cách chèn một cây kim, vào khoang cột sống ( chọc dò tủy sống ).
sự chuẩn bị
Miễn dịch: làm thế nào để chuẩn bị cho kỳ thi?
- Trước khi lấy mẫu máu, một số phòng thí nghiệm có thể yêu cầu nhịn ăn ít nhất 10-12 giờ. Trong thời gian này, nó được phép lấy một lượng nước nhỏ.
- Sự kết hợp miễn dịch có thể được thực hiện trên nước tiểu thu thập tại một thời điểm cụ thể trong ngày (ngẫu nhiên) hoặc trong 24 giờ, do đó cần phải lấy trước các hộp đựng vô trùng thích hợp.
- Tuy nhiên, đối với sự kết hợp miễn dịch của rượu, không cần chuẩn bị đặc biệt.
Điều gì có thể thay đổi kết quả của kỳ thi?
Một số loại thuốc có thể ảnh hưởng đến kết quả của việc điều hòa miễn dịch, vì vậy nên báo cáo với bác sĩ bất kỳ phương pháp điều trị dược lý nào đang được tiến hành.
Trong sáu tháng trước khi kiểm tra, việc sử dụng vắc-xin (tiêm chủng) và sử dụng thuốc, như phenytoin, Procainamide, thuốc tránh thai, methadone và gamma-globulin điều trị, có thể làm tăng nồng độ của globulin miễn dịch. Các loại thuốc khác có thể làm thay đổi kết quả xét nghiệm là corticosteroid, neomycin, acetylsalicylic acid và chlorpromazine.
Giải thích kết quả
Kết quả của immunofixation được đánh giá kết hợp với kết quả của các phân tích khác. Việc giải thích kết quả này tùy thuộc vào bác sĩ đa khoa hoặc chuyên gia tham khảo, người có thể xác định và báo cáo các thay đổi đối với một gamma globulin cụ thể (ví dụ, dải trùng với globulin miễn dịch G) đối với một số bệnh. Đánh giá này xác nhận hoặc ủng hộ giả thuyết chẩn đoán: nói chung, sự kết hợp miễn dịch có thể tiết lộ một hồ sơ gamma globulin bình thường hoặc xác định một protein đơn dòng hoặc một mô hình đa dòng .
Khi bệnh đã được xác định, có thể thực hiện phương pháp miễn dịch để:
- Theo dõi bệnh theo thời gian, sau đó theo dõi liệu trình (theo dõi);
- Xác nhận tính hiệu quả của giao thức trị liệu .
Ưu và nhược điểm của miễn dịch
So với điện di protein, immunofixation:
- Nó nhanh hơn : kết quả của sự kết hợp miễn dịch thường thu được trong vòng ba giờ;
- Nó nhạy cảm hơn (dù chỉ một chút): sự kết hợp miễn dịch có thể tiết lộ một loại globulin miễn dịch được loại trừ khỏi điện di protein, đặc biệt là ở nồng độ thấp (dưới 1 gram / lít).
Hơn nữa, kết hợp miễn dịch:
- Nó có thể được tự động hóa một phần ;
- Nó dễ đọc và dễ hiểu .
Tuy nhiên, immunofixation đắt hơn điện di protein và chỉ cho phép phân tích gamma globulin .
Kết quả bình thường
Trong Immunofixation, một con đường bình thường bao gồm:
- Một dải trùng khớp với immunoglobulin G ( IgG ) tối hơn;
- Một dải tương ứng với immunoglobulin A ( IgA ) nhẹ hơn;
- Sự vắng mặt của băng cho immunoglobulin M ( IgM );
- Dải kappa đậm đặc hơn dải lambda (chuỗi nhẹ), với tỷ lệ 2: 1.
Trong một kết quả bình thường, các dải lớn và có sự giảm dần và đồng đều về mật độ của màu đối với các cạnh của dải miễn dịch.
Globulin gamma đa dòng
Trong một số trường hợp, tất cả các dải của sự kết hợp miễn dịch bị che khuất đồng nhất ở cùng một mức độ. Mô hình này đại diện cho sự hiện diện của globulin miễn dịch đa dòng . Cũng trong trường hợp này, các dải lớn và sự chuyển tiếp sang các cạnh của dải miễn dịch là dần dần. Dải IgM - thường vắng mặt - rộng.
Các gamma đơn dòng
Khi một dải hẹp có cạnh sắc có thể được xác định trong đường dẫn kết hợp miễn dịch, điều đó có nghĩa là việc tìm kiếm các thành phần đơn dòng là dương tính .
Việc xác định một loại globulin miễn dịch đơn dòng rất hữu ích trong chẩn đoán các tình trạng sau:
- Bệnh lý đơn dòng có ý nghĩa không xác định (MGUS);
- Đa u tủy;
- Bệnh macroglobulin Waldenstrom;
- Amyloidosis.
Hơn nữa, sự kết hợp miễn dịch có thể được sử dụng để theo dõi điều trị trong chứng loạn sản tế bào plasma (nghĩa là đa u tủy và Waldenstrom macroglobulinemia). Nếu mức độ protein đơn dòng giảm hoặc không phát hiện được sau khi hóa trị, nó có thể chỉ ra đáp ứng với điều trị . Ngược lại, một protein đơn dòng dai dẳng mặc dù điều trị là một dấu hiệu của bệnh khó chữa .
Lưu ý . Một kết quả âm tính ở sự kết hợp miễn dịch không phải lúc nào cũng loại trừ chứng loạn sắc tố plasmacellule. Ví dụ, đa u nguyên bào không tiết hoặc oligosecretory có thể cho kết quả âm tính trong cả nước tiểu và huyết thanh. Do đó, nếu nghi ngờ chẩn đoán cho bệnh lý giao tử vẫn còn cao, việc xác định tỷ lệ của Chuỗi ánh sáng Kappa / Lambda Libere ( tỷ lệ K / L ) được chỉ định.
Miễn dịch kết hợp và chẩn đoán bệnh đa xơ cứng
Sự kết hợp miễn dịch của dịch não tủy (CSF) được quy định khi bác sĩ nghi ngờ có sự hiện diện của bệnh đa xơ cứng . Trong trường hợp này, dấu vết được xác định là đặc trưng, vì nó làm nổi bật sự hiện diện của các dải được gọi là oligoclonal . Kết quả được báo cáo trong phòng thí nghiệm cho thấy là tích cực . Cần xem xét rằng các dải thường không được quan sát thấy trong quá trình miễn dịch huyết thanh, vì chúng có liên quan đến việc sản xuất các globulin gamma xâm nhập .
Tuy nhiên, cần lưu ý rằng phát hiện này không nhất thiết xác nhận chẩn đoán, vì các điều kiện khác có thể xuất hiện với các dải oligoclonal trong dịch não tủy.
Nói cách khác, việc xác định các dải oligoclonal với sự kết hợp miễn dịch của rượu là rất hữu ích để hỗ trợ chẩn đoán bệnh đa xơ cứng, nhưng phải được xác nhận bởi các nghiên cứu khác . Các điều kiện khác có thể cung cấp kết quả như vậy là viêm hệ thống thần kinh trung ương, bao gồm: viêm não liên quan đến HIV, bệnh lý thần kinh, bệnh lý thần kinh, viêm màng não Lyme, khối u ác tính CNS, viêm dây thần kinh thị giác và viêm tủy ngang.
