Tiểu luận ABTS
Đây là một phương pháp phân tích sử dụng phép đo quang phổ để xác định khả năng chống oxy hóa của mẫu. Máy quang phổ UV-Vis được sử dụng để đo độ hấp thụ của dung dịch chứa gốc ABTS • +, được tạo ra bởi quá trình oxy hóa ABST (2, 2'-azinobis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulphonate), một chất không màu ở dạng gốc được tô màu bằng cách hấp thụ các bước sóng đặc trưng trong phạm vi có thể nhìn thấy. Việc bổ sung các phân tử chống oxy hóa vào dung dịch ABTS • +, có thể hoạt động thông qua cả hydro và chuyển electron, xác định sự khử gốc tự do ở dạng không màu, với sự đổi màu của hỗn hợp phản ứng. Sự đổi màu này, tỷ lệ thuận với lượng chất chống oxy hóa hiện tại, có thể được đo bằng sự giảm độ hấp thụ trong một thời gian nhất định ở bước sóng cụ thể (734nm). Sức mạnh chống oxy hóa được thể hiện bằng cách so sánh với các giá trị độ hấp thụ được đo cho số lượng đã biết của một phân tử chống oxy hóa được chọn làm tiêu chuẩn tham chiếu, thường là axit ascobic hoặc Trolox (trong trường hợp này là có thảo luận về hoạt tính chống oxy hóa TEAC Trolox Equivalent Antoxant chống oxy hóa).
Việc đo năng lượng chống oxy hóa dựa trên việc sử dụng ABTS có ưu điểm là đơn giản và nhanh chóng. Hơn nữa, nó cho phép đo cả chất chống oxy hóa ưa nước và lipophilic trong phạm vi pH rộng. Tuy nhiên, cần lưu ý rằng gốc được sử dụng (ABTS • +) không phải là sinh lý và không có trong các hệ thống sinh học và các vấn đề lặp lại của phép đo do động lực học của các chất chống oxy hóa khác nhau thường được nêu bật.
FRAP (Ferric giảm năng lượng chống oxy hóa)
Thử nghiệm FRAP đo khả năng giảm chất chống oxy hóa chống lại các ion sắt. Đó là một phương pháp dựa trên sự chuyển điện tử, trong đó các ion sắt chuyển từ Fe3 + sang Fe2 +. Trong một số điều kiện nhất định của pH (3.6) và với sự hiện diện của TPTZ (2, 4, 6-tris (2-pyridyl) -s-triazine), các ion này tạo thành các phức chất với các đặc tính khác nhau, đặc biệt là dẫn xuất giảm (Fe2 + -TPTZ) có màu xanh lam có độ hấp thụ cực đại ở 593nm, có thể đo bằng phương pháp đo quang phổ. Do đó, khả năng khử của một chất chống oxy hóa có thể được đo bằng sự thay đổi độ hấp thụ của dung dịch chứa chất oxy hóa ở bước sóng được thiết lập để so sánh với sự thay đổi so với tiêu chuẩn (ví dụ axit ascobic).
Thử nghiệm FRAP được thiết kế để đo khả năng khử của plasma, nhưng sau đó được điều chỉnh để kiểm tra khả năng chống oxy hóa của các hợp chất tinh khiết và ma trận phức tạp. Trên thực tế, vì phương pháp này chỉ cho phép đánh giá khả năng khử thông qua việc chuyển electron, hoàn toàn bỏ qua hoạt động của các chất chống oxy hóa hoạt động thông qua chuyển hydro, nó không cho phép đo lường sự đóng góp của các phân tử, như thiols và protein, có vai trò chống oxy hóa cơ bản trong chất lỏng sinh học (ví dụ như máu). Ưu điểm của việc sử dụng phương pháp này là nó là một trong những phương pháp đơn giản nhất, nhanh nhất và ít tốn kém nhất để xác định khả năng chống oxy hóa trong ống nghiệm.
KIỂM TRA DPPH
2, 2-diphenyl-1-picrilidrazyl (DPPH •) là một gốc nitơ rất ổn định và có sẵn trên thị trường, được đặc trưng bởi màu đỏ tím đậm, làm mất màu khi giảm khi có phân tử có khả năng chống oxy hóa. Bằng phép đo quang phổ ở 517nm biến thiên độ hấp thụ của dung dịch DPPH sau khi phản ứng với hợp chất chống oxy hóa, có thể định lượng khả năng khử của chất thử cho dù nó hoạt động bằng cách chuyển hydro hoặc bằng cách chuyển electron. Kết quả thường được biểu thị bằng IC50, tức là lượng chất chống oxy hóa có khả năng làm giảm 50% nồng độ DPPH ban đầu.
Đó là một phương pháp nhanh chóng, đơn giản và kinh tế. Các giới hạn của kỹ thuật phân tích này được đưa ra bởi khả năng các kết quả phân tích bị làm sai lệch trong trường hợp các phân tử thử nghiệm hấp thụ trong cùng bước sóng với gốc DPPH hoặc trong sự hiện diện của các phân tử lớn bị vướng víu mà không họ phản ứng với phần phản ứng của rễ. Điều này xác định rằng DPPH phản ứng với các chất chống oxy hóa chậm hơn tới 1000 lần so với các gốc peroxyl.
PCL TEST (Quang hóa)
Thử nghiệm PCL dựa trên phản ứng của một loại gốc cụ thể, anion superoxide (O2 • -), được tạo ra bằng phương pháp quang hóa bằng bức xạ UV, với một hợp chất có khả năng phát quang hóa. Điểm đánh dấu được sử dụng là luminol, một phân tử mà khi bị oxy hóa bởi các gốc tự do phát ra ánh sáng có thể đo được bằng một dụng cụ đặc biệt (Photochem®). Sự hiện diện của các chất chống oxy hóa trong hỗn hợp khẩu phần làm mất tác dụng của các loài gốc bằng cách ức chế sự phát quang hóa. Phân tích PCL rất nhanh và nhạy cảm. Ngoài ra, với việc áp dụng hai giao thức phân tích khác nhau, được gọi là ACW (Khả năng chống oxy hóa hòa tan trong nước) và ACL (Khả năng chống oxy hóa Lipid hòa tan), có thể đo được sự đóng góp của tổng khả năng chống oxy hóa của cả thành phần hòa tan trong nước C, axit amin, v.v.) của chất béo hòa tan (tocopherols, tocotrienols, carotenoids, v.v.). Để so sánh các giá trị được ghi với các phép đo liên quan đến các phân tử tham chiếu tiêu chuẩn, axit ascorbic cho giao thức ACL và Trolox cho giao thức ACW, thu được khả năng chống oxy hóa của sản phẩm thử nghiệm.
